Tests - Hepatitis C

Hintergrundinformation

Weltweit sind nach Angaben der Universität des Saarlandes zirka 170 Millionen Menschen mit dem Hepatitis C-Virus infiziert. In Europa wird die Zahl der Infizierten auf mindestens fünf Millionen geschätzt. In Deutschland sind ca. 500.000 Menschen chronisch infiziert.

Ein Dilemma ist, dass die Krankheit oft erst in einem späten Stadium bei einem Routinetest erkannt wird. Das mindert die Aussichten auf Heilung erheblich. Denn je länger ein Patient mit HCV infiziert ist, desto schlechter spricht er auf eine Therapie an. Umso wichtiger ist es, dass die zum Beispiel im Rahmen einer Blutspende verwendeten Tests höchst sensitiv und spezifisch sind, um den Virus erst nachweisen und dann den Therapieverlauf adäquat kontrollieren zu können.

COBAS® AMPLICOR® HCV Test (qualitativ)

Der HCV-Test mit COBAS® AMPLICOR® ist ein standardisierter Test auf PCR-Basis, der einen schnellen, zuverlässigen und direkten Nachweis der Hepatitis C-Virämie gestattet. Er gewährleistet auch dann eine hochempfindliche, spezifische Detektion und Diagnostik, wenn herkömmliche Methoden ungeeignet sind, so zum Beispiel im frühen Krankheitsstadium, wenn der infizierte Patient noch anti-HCV-negativ ist, sowie nach passivem Antikörper-Transfer, zum Beispiel bei Neugeborenen.

Zur Durchführung des qualitativen Tests wird die virale HCV-RNS zunächst aus 200µl Plasma oder Serum während der manuellen Aufreinigung freigesetzt. In der anschließenden automatischen Bearbeitung der Probe durch das COBAS® AMPLICOR® Instrument erfolgt die Reverse Transkription, Amplifikation der komplementären DNS (cDNS) und abschließend deren Detektion.

Die Nachweisgrenze des Tests liegt bei 50 IU/ml für Plasmaproben beziehungsweise bei 60 IU/ml für Serum, jeweils bei einer Spezifität von über 99,99%.

Bei positive Proben kann nach dem COBAS® AMPLICOR® HCV Test die Genotypisierung mit dem LINEAR ARRAY HCV Genotyping Test erfolgen.

Die von Roche entwickelte AmpErase® schützt vor Kontaminationen mit Amplifikaten aus vorhergehenden PCRs. Bevor die eigentliche PCR startet, werden derartige DNS-Amplifikate spezifisch abgebaut, da sie Desoxy-Uracil enthalten.

COBAS® AMPLICOR® HCV Monitor (quantitativ)

Der hochempfindliche und spezifische quantitative HCV-PCR-Test mit COBAS® AMPLICOR® hilft dem Arzt, die Virämie und das Ansprechen des Patienten auf die Behandlung zuverlässig zu überwachen. Zur Testdurchführung wird die HCV-RNS zunächst aus 200µl Serum oder Plasma manuell aufgereinigt. Nach Zugabe des Mastermixes erfolgt die Reverse Transkription, Amplifikation und Detektion auf dem COBAS® AMPLICOR®. Während der gesamten Reaktion werden drei Kontrollen mitgeführt (Negativkontrolle, niedrigkonzentrierte HCV-RNS, hochkonzentrierte HCV-RNS), die in jeder Probe die Qualität der Ergebnisse sicherstellen.

Die von Roche entwickelte AmpErase® schützt vor Kontaminationen mit Amplifikaten aus vorhergehenden PCRs. Bevor die eigentliche PCR startet, werden derartige DNS-Amplifikate spezifisch abgebaut, da sie Desoxy-Uracil enthalten.

COBAS® AmliPrep/COBAS® AMPLICOR® HCV Test (qualitativ)

Der COBAS® AmliPrep/COBAS® AMPLICOR® HCV Test erlaubt eine vollautomatisierte PCR auf Basis der klassischen Endpunktbestimmung der Amplifikation. Dazu werden 700µl Plasma oder Serum mit den Kontrollen (eine Positivkontrolle und eine Negativkontrolle pro Lauf) in die Reagenzkassetten pipettiert und mit dem vorzubereitenden Mastermix sowie den weiteren Kontrollen in das COBAS® AmpliPrep Instrument geladen.

Der einzige manuelle Schritt im gesamten Testablauf ist die Überführung der Proben vom COBAS® AmpliPrep Instrument in das COBAS® AMPLICOR® Instrument. Alle anderen Arbeitsschritte von der RNS-Aufreinigung über die Reverse Transkription, Amplifikation, Hybridisierung bis zur abschließenden Detektion werden voll automatisiert durchgeführt.

Eine Interne Kontrolle, die in allen Schritten mit bearbeitet wird, ermöglicht eine sichere Aussage über die Ergebnisse. Die Nachweisgrenze liegt abhängig vom Genotyp zwischen 20 – 100 IU/ml.

Die von Roche entwickelte AmpErase® schützt vor Kontaminationen mit Amplifikaten aus vorhergehenden PCRs. Bevor die eigentliche PCR startet, werden derartige DNS-Amplifikate spezifisch abgebaut, da sie Desoxy-Uracil enthalten.

COBAS® TaqMan® 48 HCV Test (quantitativ)

Die Real-Time PCR mit dem COBAS® TaqMan® 48 HCV Test ermöglicht es, die Menge an HCV-RNS in einer Reaktion exakt zu berechnen. Für den Test muss die HCV-RNS aus 500µl Plasma oder Serum manuell mit dem High Pure System aufgereinigt werden. Drei Kontrollen (Negativkontrolle, niedrigkonzentrierte HCV-RNS, hochkonzentrierte HCV-RNS) werden zusätzlich zu den Proben bei jeder Messung mitgeführt. Danach werden die Proben in das COBAS® TaqMan® Instrument überführt, das automatisiert die Reverse Transkription, Amplifikation, Hybridisierung und Detektion der Proben durchführt. Die Sensitivität dieses Testes liegt bei 9,3 HCV-RNS IE/ml für EDTA-Plasma und 8,8 HCV-RNS IE/ml für Serum, der lineare Bereich für die quantitative Messung im COBAS® TaqMan® Instrument reicht von 25 – 3,91 x 108 IE/ml. Quantifiziert werden die Genotypen 1 bis 6.

Die von Roche entwickelte AmpErase® schützt vor Kontaminationen mit Amplifikaten aus vorhergehenden PCRs. Bevor die eigentliche PCR startet, werden derartige DNS-Amplifikate spezifisch abgebaut, da sie Desoxy-Uracil enthalten.

COBAS® AmpliPrep/COBAS® TaqMan® HCV Test (quantitativ)

Der COBAS® AmpliPrep/COBAS® TaqMan® HCV Test erlaubt die vollautomatisierte Durchführung der Real-Time PCR – von der Probenvorbereitung mit dem COBAS® AmpliPrep Instrument bis zur Quantifizierung der amplifizierten RNS mit dem COBAS® TaqMan®. Zunächst werden 1000µl Plasma in die Reagenzgefäße des COBAS® AmpliPrep Instruments (S-Tubes) pipettiert. Danach erfolgt die Beladung des COBAS® AmpliPrep Instruments mit den Proben sowie den notwendigen barcodierten Reagenzkassetten. Drei Kontrollen (Negativkontrolle, niedrigkonzentrierte HCV-RNS, hochkonzentrierte HCV-RNS) werden zusätzlich zu den Proben bei jeder Messung mitgeführt. Die weiteren Arbeitsschritte laufen voll automatisiert bis zur Quantifizierung durch den COBAS® TaqMan® beziehungsweise den COBAS® TaqMan® 48. Der Test kann die HCV-Genotypen 1 bis 6 mit einer Sensitivität von 15 HCV-RNS IE/ml nachweisen (der lineare Bereich für die Messung liegt zwischen 43 – 6,9 x 107 IE/ml). Die Spezifität beträgt 100%.

Die von Roche entwickelte AmpErase® schützt vor Kontaminationen mit Amplifikaten aus vorhergehenden PCRs. Bevor die eigentliche PCR startet, werden derartige DNS-Amplifikate spezifisch abgebaut, da sie Desoxy-Uracil enthalten.

LINEAR ARRAY HCV Genotyping Test

Der Test ergänzt die vorhandenen HCV-Screeningtests, indem er den HCV-Genotyp in einer Patientenprobe bestimmt. Dies ist deshalb besonders wichtig, weil sich die Therapie einer Hepatitis C-Infektion sowohl in Dauer als auch Dosierung nach dem vorliegenden HCV-Genotyp orientiert. Der Test unterscheidet zwischen den Genotypen 1 bis 6.

Nach der Amplifikation der HCV-RNS aus Serum oder Plasma durch den COBAS® AMPLICOR® HCV Test beziehungsweise den AMPLICOR® HCV Test erfolgt die manuelle Hybridisierung der Amplifikate mit den Genotypisierungsstreifen des LINEAR ARRAY HCV Genotyping Tests. Die Nachweisgrenze für EDTA-Serum beziehungsweise EDTA-Plasma liegt bei 500 IE/ml.

Die von Roche entwickelte AmpErase® schützt vor Kontaminationen mit Amplifikaten aus vorhergehenden PCRs. Bevor die eigentliche PCR startet, werden derartige DNS-Amplifikate spezifisch abgebaut, da sie Desoxy-Uracil enthalten.