Tests

Hintergrundinformation

Herpesviren sind weit verbreitet; sie nutzen viele Wirbeltierarten als Wirt: vom Mensch über den Affen bis hin zu Fröschen und Fischen. Beim Menschen sind je nach Virustyp 50 bis 90 Prozent der Erwachsenen seropositiv, da sie sich üblicherweise im Kindes- oder Jugendalter angesteckt haben. Die durch das Varicella-Zoster-Virus (VZV) hervorgerufenen Windpocken sind eine typische Kinderkrankheit. Auch Lippenherpes (Herpes simplex-Virus, HSV ) und das Pfeiffersche Drüsenfieber, verursacht durch das Epstein-Barr-Virus (EBV), sind weit verbreitete Krankheiten. Die Erstinfektion mit dem Zytomegalie-Virus (CMV) verläuft dagegen oft asymptomatisch. Beim Erwachsenen tritt das Zytomegalie-Virus erst in Erscheinung, wenn beispielsweise durch die Übertragung von der Mutter bei Embryonen oder Neugeborenen Multi-Organentzündungen auftreten. Allen Herpesviren gemeinsam ist die Eigenschaft, nach der Erstinfektion lebenslang latent in ihrem Wirt zu „schlummern“. Reaktiviert werden können sie beispielsweise durch Stress, hormonelle Umstellung während der Schwangerschaft oder Suppression des Immunsystems etwa bei Transplantations-, Tumor- oder Aids-Patienten. In diesen Situationen nehmen die Erkrankungen häufig schwere Verläufe.

Abb.: CD LightCycler

Makro CD zur standardisierten PCR-Programmierung und Auswertung

Für die Diagnostik der vier wichtigsten Humanen Herpesviren CMV, HSV1/2, EBV und VZV hat Roche in Kooperation mit der schwedischen Firma Sangtec neue CE-IVD markierte Testkits auf Basis der Real-Time PCR-Technologie auf den Markt gebracht, beziehungsweise steht im Fall des EBV Testkits kurz vor der Markt-
einführung. Die einheitliche Aufarbeitungsmethode mit dem High Pure Viral Nucleic Acid Kit und eine gemeinsame Interne Kontrolle ermöglichen die Analyse verschiedener Parameter aus derselben Probenaufarbeitung. Alle vier Parameter werden auf einem Real Time PCR-Analysesystem, dem LightCycler® 2.0 Instrument (CE-IVD) mit demselben PCR-Profil bestimmt. Die Software-Programmierung und standardisierte Testauswertung übernehmen Makros, die einmalig von einer CD in die Gerätesoftware geladen werden.

Für Sicherheit und verlässliche Ergebnisse sorgt auch die komplette Qualitätskontrolle auf der Reagenzseite. So wird die Negativkontrolle parallel zu den Proben bereits in die Nukleinsäureaufarbeitung integriert, so dass der gesamte Workflow kontrolliert wird. Allen Proben und der Negativkontrolle wird bei der Nukleinsäureaufarbeitung eine Interne Kontrolle zugegeben, die während der PCR im Multiplexverfahren mit amplifiziert wird. Falsch-negative Ergebnisse durch Nukleinsäureverlust während der Aufarbeitung oder Inhibition der PCR werden somit ausgeschlossen. Die Positivkontrolle ist ein dem jeweiligen Virus entsprechendes DNS-Fragment; sie trägt dazu bei, falsch-negative Ergebnisse auszuschließen und die Spezifität der PCR zu gewährleisten. Die Hot-Start Funktion der DNS-Polymerase und eine optimale Primerselektion tragen ebenfalls zu der hohen Spezifität der Tests bei. Um eine Kontamination zu vermeiden, enthält der PCR-Mastermix Uracil-DNS-Glykosylase, ein Enzym, das selektiv Uracil-haltige Amplifikate abbaut. Das Temperaturprofil dieser vor der PCR ablaufenden Reaktion ist bereits im Makro programmiert.

Bei hoher Sensitivität aller Tests zeichnen sich die Kits zur CMV- und EBV-Quantifizierung zusätzlich durch einen besonders breiten linearen Bereich aus. Die Differenzierung einer HSV-positiven Probe in Typ 1 oder Typ 2 erfolgt schon während der PCR durch spezifische Scorpion-Primer, so dass eine Analyse im Anschluss an die Amplifikation entfällt. Besonders bei der Bestimmung so genannter Notfall-Parameter bietet die schnelle LightCycler® Real Time-Technologie echte zeitliche Vorteile.

LightCycler® CMV Quant Kit

LightCycler® CMV Quant Kit ist ein Assay zur In-vitro-Diagnostik, der die Amplifikation von Nukleinsäuren mithilfe der Polymerase-Kettenreaktion (PCR) verwendet. Dazu wird Zytomegalievirus (CMV)-DNS aus 200 µl humaner Vollblut- oder Plasmaproben mit dem High Pure Viral Nucleic Acid Kit isoliert und im LightCycler® 2.0 (CE-IVD) Instrument analysiert. Ein positives Ergebnis über einer definierten Nachweisgrenze wird dann als Virustiter (Kopien/ml) angegeben, wenn die Konzentration in den linearen Bereich fällt.

Leistungsmerkmale des LightCycler® CMV Quant Kit:

Probenmaterial:

Vollblut

EDTA- oder
ACD-Plasma
Nachweisgrenze:
(95% Konfidenzintervall) 		392 Kopien / ml 235 Kopien / ml
Linearer Bereich: 1 x 103 bis 2 x 107 Kopien / ml 1 x 103 bis 2 x 107 Kopien / ml
Subtyp-Erfassung: CMV Stämme AD169, Towne, Davies
Klinische Spezifität: 100 %

Der LightCycler® CMV Quant Kit enthält alle Reagenzien für die Analyse von 72 Patientenproben, einschließlich der erforderlichen Kontrollen. Zur Prävention von Kontaminationen sind alle Reagenzien aliquotiert.

Abb.: LightCycler® CMV Quant Kit

LightCycler® CMV Quant Kit

  • 4 CMV-Kalibratoren für die Standardkurve
  • Negativkontrolle (NTC) zum Einsatz in der Aufarbeitung
  • Interne Kontrolle zum Einsatz in der Aufarbeitung
  • Mastermix mit DNS-Polymerase, Uracil-DNS-Glykosylase, Primer/Sonden und Nukleotiden
  • Magnesiumchlorid-Lösung
  • Leere Reagenzientubes zum Ansetzen der PCR-Reaktion

LightCycler® EBV Quant Kit

LightCycler® EBV Quant Kit ist ein Assay zur In-vitro-Diagnostik, der die Amplifikation von Nukleinsäuren mithilfe der Polymerase-Kettenreaktion (PCR) verwendet. Dazu wird Epstein-Barr-Virus (EBV)-DNS aus 200 µl humaner Vollblut- oder Plasmaproben mit dem High Pure Viral Nucleic Acid Kit isoliert und im LightCycler® 2.0 (CE-IVD) Instrument analysiert. Ein positives Ergebnis liegt über einer definierten Nachweisgrenze und wird dann als Virustiter (Kopien/ml) angegeben, wenn die Konzentration in den linearen Bereich fällt.

Leistungsmerkmale des LightCycler® EBV Quant Kit:

Probenmaterial:

Vollblut

EDTA- oder
ACD-Plasma
Nachweisgrenze:
(95% Konfidenzintervall) 		359 Kopien / ml 229 Kopien / ml
Linearer Bereich: 2 x 103 Kopien / ml 1 x 103 Kopien / ml
Subtyp-Erfassung: EBV Genotyp A (Typ 1), EBV Genotyp B (Typ 2)
Klinische Spezifität: 100 %

Der LightCycler® EBV Quant Kit enthält alle Reagenzien für die Analyse von 72 Patientenproben, einschließlich der erforderlichen Kontrollen. Zur Prävention von Kontaminationen sind alle Reagenzien aliquotiert.

Abb.: LightCycler® EBV Quant Kit

LightCycler® EBV Quant Kit

  • 4 EBV-Kalibratoren für die Standardkurve
  • Negativkontrolle (NTC) zum Einsatz in der Aufarbeitung
  • Interne Kontrolle zum Einsatz in der Aufarbeitung
  • Mastermix mit DNS-Polymerase, Uracil-DNS-Glykosylase, Primer/Sonden und Nukleotiden
  • Magnesiumchlorid-Lösung
  • Leere Reagenzientubes zum Ansetzen der PCR-Reaktion

LightCycler® VZV Qual Kit

LightCycler® VZV Qual Kit ist ein Assay zur In-vitro-Diagnostik, der die Amplifikation von Nukleinsäuren mithilfe der Polymerase-Kettenreaktion (PCR) verwendet. Dazu wird Varicella-Zoster-Virus (VZV)-DNS aus 200 µl humaner Liquorproben oder Bläschenabstrichen mit dem High Pure Viral Nucleic Acid Kit isoliert und im LightCycler® 2.0 (CE-IVD) Instrument analysiert.

Leistungsmerkmale des LightCycler® VZV Qual Kit:

Probenmaterial:

Liquor

Bläschenabstriche
Nachweisgrenze:
(95% Konfidenzintervall) 		157 Kopien / ml 384 Kopien / ml
Klinische Spezifität: 100 %

Der LightCycler® VZV Qual Kit enthält alle Reagenzien für die Analyse von 72 Patientenproben, einschließlich der erforderlichen Kontrollen. Zur Prävention von Kontaminationen sind alle Reagenzien aliquotiert.

Abb.: LightCycler® VZV Qual Kit

LightCycler® VZV Qual Kit

  • VZV-Positivkontrolle (PC) zum Einsatz in der PCR
  • Negativkontrolle (NTC) zum Einsatz in der Aufarbeitung
  • Interne Kontrolle zum Einsatz in der Aufarbeitung
  • Mastermix mit DNS-Polymerase, Uracil-DNS-Glykosylase, Primer/Sonden und Nukleotiden
  • Magnesiumchlorid-Lösung
  • Leere Reagenzientubes zum Ansetzen der PCR-Reaktion

LightCycler® HSV 1/2 Qual Kit

LightCycler® HSV 1/2 Qual Kit ist ein Assay zur In-vitro-Diagnostik, der die Amplifikation von Nukleinsäuren mithilfe der Polymerase-Kettenreaktion (PCR) verwendet. Dazu wird Herpes simplex-Virus (HSV)-DNS aus 200 µl humaner Liquorproben oder Bläschenabstrichen mit dem High Pure Viral Nucleic Acid Kit isoliert und im LightCycler® 2.0 (CE-IVD) Instrument analysiert. Ein positives Ergebnis wird gleichzeitig in HSV Typ 1 oder 2 differenziert.

Leistungsmerkmale des LightCycler® HSV 1/2 Qual Kit:

Probenmaterial:

Liquor

Bläschenabstriche
Nachweisgrenze:
(95% Konfidenz-
intervall) 		79 Kopien HSV 1/ ml
84 Kopien HSV 2/ ml 		392 Kopien HSV 1/ ml
431 Kopien HSV 2/ ml
Subtyp-Erfassung: HSV Typ 1, HSV Typ 2
Klinische Spezifität: 100 %

Der LightCycler® HSV 1/2 Qual Kit enthält alle Reagenzien für die Analyse von 72 Patientenproben, einschließlich der erforderlichen Kontrollen. Zur Prävention von Kontaminationen sind alle Reagenzien aliquotiert.

Abb.: LightCycler® HSV 1/2 Qual Kit

LightCycler® HSV 1/2 Qual Kit

  • HSV-Positivkontrolle (PC) zum Einsatz in der PCR
  • Negativkontrolle (NTC) zum Einsatz in der Aufarbeitung
  • Interne Kontrolle zum Einsatz in der Aufarbeitung
  • Mastermix mit DNS-Polymerase, Uracil-DNS-Glykosylase, Primer/Sonden und Nukleotiden
  • Magnesiumchlorid-Lösung
  • Leere Reagenzientubes zum Ansetzen der PCR-Reaktion