Geräte

COBAS® AmpliPrep

COBAS® AmpliPrep ist das erste CE-markierte System für die automatisierte Aufreinigung von DNS und RNS mit der Magnetic Bead Technologie. Es ersetzt die zeitaufwändige und fehleranfällige manuelle Probenaufarbeitung und steigert dadurch Qualität, Sicherheit und Effizienz im Labor. Außer der Beladung des Instruments mit den barcodierten Verbrauchsmaterialien und Proben sind keine manuellen Schritte notwendig. Das COBAS® AmpliPrep System kann je nach Anforderung mit verschiedenen PCR-Systemen kombiniert werden und bietet damit die maßgeschneiderte Lösung für jedes PCR-Labor.

COBAS® AmpliPrep ist mit den Systemen COBAS® TaqMan® , COBAS® TaqMan® 48 und COBAS® AMPLICOR® kombinierbar. Zeitgleich kann es vier unterschiedliche Tests abarbeiten und ist dabei kontinuierlich mit Proben nachladbar (bis zu 72 Proben „on board“).

Jede Probe wird in einer eigenen Einheit (SPU) zur Aufreinigung der Nukleinsäure bearbeitet. Bei den Pipettiervorgängen bleiben die Pipettenspitzen innerhalb eines Spritzschutzes, Kontaminationen werden so vermieden. Spezielle Zuleitungen ermöglichen es, dass die Spitze mit Flüssigkeit nie in die Präparationskammer taucht. Am Ende der Aufreinigung wird die Abfallkammer mit dem S-Tip verschlossen.

  • Die generische Aufarbeitung

    Durch Zugabe von Lysepuffer und Proteinase K zur Probe werden Nukleinsäuren freigesetzt und Proteine abgebaut. Bei der generischen Probenaufarbeitung für COBAS® TaqMan® - oder andere PCR-Systeme werden die Nukleinsäuren anschließend an magnetische Silikapartikel (Beads) gebunden. Nach Waschschritten zur Entfernung von Proteinen und PCR-Inhibitoren erfolgt die Elution der gereinigten Nukleinsäuren bei erhöhter Temperatur. Die eluierte Nukleinsäure wird in das PCR-Gefäß (K-Tube) pipettiert und mit Mastermix gemischt. Bei der Probenaufarbeitung für andere PCR-Systeme werden mit dem Total Nucleic Acid Kit die Beads abgetrennt und die eluierte Nukleinsäure in Output-Tubes überführt.

  • Die sequenzspezifische Aufarbeitung

    Im Falle der Probenpräparation für COBAS® AMPLICOR® wird die Virusnukleinsäure durch den Einsatz von sequenzspezifischen biotinylierten Sonden („Target Capture“-Prinzip) isoliert. Die eluierten Nukleinsäuren werden mit den Beads in Output Tubes überführt.

Klassische PCR mit dem COBAS® AMPLICOR®

Für das COBAS® AMPLICOR® System steht ein breites Spektrum an COBAS® AMPLICOR® Tests zur Verfügung. Als erstes PCR-System, das Amplifikation und Detektion vollautomatisch durchführt, ermöglicht das COBAS® AMPLICOR® System einen effizienten Arbeitsablauf im PCR-Routinelabor. Die Ergebnisse von bis zu 24 Proben können dabei parallel in zwei unabhängigen Thermocyclern qualitativ oder quantitativ bestimmt werden.

Amplifikation und Detektion werden in zwei Schritten nacheinander durchgeführt:

Nach der PCR mit Biotin-gelabelten Primern erfolgt eine letzte Denaturierung der Amplifikate. Diese hybridisieren mit spezifischen Detektionssonden, die an magnetische Beads gebunden sind. Ein Magnet hält die Hybride aus Amplifikat und Sonde nun im Reaktionsröhrchen fest, während alle anderen Bestandteile der PCR (Primer, Salze, etc.) in den Waschschritten entfernt werden.

Das hinzugefügte Avidin-Meerrettich-Peroxidase-Konjugat bindet an das Biotin der Amplifikate und setzt das Substrat Tetramethylbenzidin in blaue Farbpräzipitate um.

Abschließend erfolgt die kolorimerische Messung im Photometer des COBAS® AMPLICOR® Systems

Real-Time PCR mit dem COBAS® TaqMan®

Das Prinzip der Real-Time PCR beruht auf Detektion und Quantifizierung eines fluoreszierenden Reporters während der PCR-Amplifikation. Mit der Real-Time PCR wird der ansonsten arbeitsaufwändige Prozess von Amplifikation, Detektion und Quantifizierung von PCR oder Real-Time PCR durch die Quantifizierung des Reaktionsproduktes in jedem Zyklus automatisiert – und das bei jeder Probe. Quantitative Ergebnisse sind somit unmittelbar nach der PCR-Amplifikation – ohne zusätzliche Reinigung oder Prozessierung der PCR-Produkte – verfügbar. Das Risiko der Kreuzkontamination durch PCR-Produkte ist dadurch minimiert, dass nach der PCR keine weiteren Schritte erforderlich sind. Dieser Vorteil macht die Real-Time PCR zu einem Verfahren mit besonderem Wert für diagnostische Anwendungen. Die Real-Time PCR ist auch für viele andere Anwendungen hervorragend geeignet, darunter die Genexpressionsanalyse, die Pathogendektion, die bakterielle und virale Konzentrationsbestimmung sowie die Unterscheidung genomischer Allele beziehungsweise Polymorphismen.

  • COBAS® TaqMan® 48 Instrument

    COBAS® TaqMan® 48 ist ein kompaktes Tischinstrument, das manuelle Schritte mithilfe der Real-Time PCR-Technologie reduziert und Analysezeiten verkürzt. Amplifikation und Real-Time Detektion erfolgen im selben, geschlossenen Reaktionsgefäß im COBAS® TaqMan® 48 Analyzer. Mit zwei unabhängigen Thermocyclern können je nach Bedarf auch unterschiedliche Parameter parallel bearbeitet werden.

    Der PCR-Mastermix enthält neben den spezifischen Primern auch Hydrolysesonden, die mit den PCR-Produkten hybridisieren. Hydrolysesonden sind mit zwei Fluorochromen beladen, die bei intakter Sonde kein Messsignal abgeben. Erst wenn im nächsten PCR-Zyklus die DNS-Polymerase auf die Sonde trifft und sie durch Hydrolyse degradiert, werden die beiden Fluorochrome räumlich getrennt und ein messbares Fluoreszenzsignal emittiert. Im COBAS® TaqMan® 48 Instrument wird dieses Lichtsignal erfasst und an eine Datenstation weitergeleitet, wo mithilfe der AMPLILINK Software die zum Fluoreszenzsignal proportionalen Mengen an PCR-Produkten errechnet wird. Mit dieser Hydrolyse-Sonden-Technologie erreichen die COBAS® TaqMan® 48 Tests einen breiten linearen Messbereich bei gleichzeitig hoher Sensitivität.

  • COBAS® TaqMan® Instrument

    COBAS® TaqMan® bietet mit vier unabhängigen Thermocyclern und der automatisierten Probenvorbereitung mit COBAS® AmpliPrep die ideale Lösung für das Hochdurchsatzlabor. Durch die Verknüpfung der beiden Systeme mit einer Dockingstation entfällt der manuelle Probentransfer und zugleich sind Analysen über Nacht möglich. Jede Instrumentekomponente besteht aus einem in sich abgeschlossenen Bereich, so dass dadurch auch die Anforderungen an die räumliche Trennung im Bereich der PCR erfüllt sind.