Tests

Hintergrundinformation

Das Aids verursachende HI-Virus ist eines der größten Gesundheitsprobleme unserer Zeit. Die Weltgesundheitsorganisation (WHO) schätzt, dass Ende 2005 weltweit rund 40 Millionen Menschen mit HIV infiziert waren, jährlich kommen zirka fünf Millionen Neuinfektionen hinzu und drei Millionen Menschen sterben an den Folgen der Infektion.

Bislang ist es weder möglich, gegen das HI-Virus zu impfen, noch eine HIV-Infektion auszuheilen. Diese kann allerdings mit Medikamente zurückgedrängt werden. Entscheidend hierfür ist eine effiziente Diagnostik und Verlaufskontrolle.

COBAS® AMPLICOR® HIV-1 Monitor (quantitativ)

Mit dem hochempfindlichen und spezifischen quantitativen HIV-1-PCR-Test mit COBAS® AMPLICOR® ist es möglich, die Viruskonzentration im Blut zu bestimmen. Dieser Parameter ist zusammen mit der CD4-Zellzahl geeignet, den optimalen Beginn einer antiviralen Therapie festzulegen und ihre Wirksamkeit zu überwachen, um die Therapie gegebenenfalls ändern zu können.

Zunächst werden 200µl des Probenmaterials (Plasma) lysiert und die HIV-RNS extrahiert. Zusammen mit zwei Positivkontrollen HIV-RNS (hochkonzentriert und niedrigkonzentriert) und einer Negativkontrolle werden die Proben in Reaktionsgefäße mit dem vorzubereitenden Mastermix pipettiert und zur automatischen Amplifikation, Hybridisierung und Detektion in das COBAS® AMPLICOR® Instrument geladen.

Der lineare Bereich für die quantitative Bestimmung der HIV-RNS liegt bei 400 – 750.000 Kopien/ml. Alternativ kann die Aufreinigung nach dem UltaSensitive-Verfahren durchgeführt werden, was die Sensitivität auf 50 Kopien/ml steigert.

Die von Roche entwickelte AmpErase® schützt vor Kontaminationen mit Amplifikaten aus vorhergehenden PCRs. Bevor die eigentliche PCR startet, werden derartige DNS-Amplifikate spezifisch abgebaut, da sie Desoxy-Uracil enthalten.

COBAS® AmliPrep/COBAS® AMPLICOR® HIV-1 Test (quantitativ)

Der COBAS® AmliPrep/COBAS® AMPLICOR® HIV-1 Test erlaubt eine vollautomatisierte PCR auf Basis der klassischen Endpunktbestimmung der Amplifikation. Damit leistet dieser Test einen Beitrag zur Prozessoptimierung im Labor. Für die automatisierte Probenvorbereitung durch das COBAS® AmpliPrep® Instrument werden 70µl Plasma (beziehungsweise 500µl für die UltraSensitive-Methode) benötigt. Nach dem Beladen des Instruments mit den Proben, Kontrollen (Negativkontrolle, hochkonzentrierte HIV-RNS, niedrigkonzentrierte HIV-RNS) und den dazugehörigen Reagenzien läuft die Probenaufbereitung vollautomatisiert ab. Nach der manuellen Überführung der Proben in das COBAS® AMPLICOR® Instrument wird auch die restliche Testdurchführung (Reverse Transkription, Amplifikation, Hybridisierung und Detektion) vollautomatisch durchgeführt.

Die von Roche entwickelte AmpErase® schützt vor Kontaminationen mit Amplifikaten aus vorhergehenden PCRs. Bevor die eigentliche PCR startet, werden derartige DNS-Amplifikate spezifisch abgebaut, da sie Desoxy-Uracil enthalten.

COBAS® TaqMan® 48 HIV-1 Test (quantitativ)

Die Real-Time PCR mit dem COBAS® TaqMan® 48 HIV-1 Test ermöglicht es, die Menge an HIV-1-RNS in einer Reaktion spezifisch zu ermitteln. Aus 500µl EDTA-Plasma wird mit dem High Pure System Kit manuell die HIV-1-RNS extrahiert. Nach der Extraktion wird die aufgereinigte Probe zu den Testreagenzien pipettiert und für die automatische Reverse Transkription, Amplifikation und Quantifikation in das COBAS® TaqMan® 48 Instrument geladen. Bei jedem Lauf müssen drei Kontrollen (Negativkontrolle, hochkonzentrierte HIV-RNS, niedrigkonzentrierte HIV-RNS) mitgeführt werden. Nachgewiesen werden die HIV-1-Subtypen A – H der Gruppe M mit einer Sensitivität von 47 HIV-1-RNS-Kopien/ml, der lineare Bereich liegt zwischen 47 – 1 x 107 HIV-1-RNS-Kopien/ml (1 Kopie HIV-1 RNS = 1,7 IE).

Die von Roche entwickelte AmpErase® schützt vor Kontaminationen mit Amplifikaten aus vorhergehenden PCRs. Bevor die eigentliche PCR startet, werden derartige DNS-Amplifikate spezifisch abgebaut, da sie Desoxy-Uracil enthalten.

COBAS® AmpliPrep/COBAS® TaqMan® HIV-1 Test,v2.0 (quantitativ)

Der COBAS® AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1 Test, v2.0 erlaubt die automatisierte Durchführung der Real-Time-PCR von der Probenvorbereitung mit dem COBAS® AmpliPrep Instrument bis zur Quantifizierung der Amplifikate im COBAS® TaqMan®- oder COBAS® TaqMan® 48-Analyser.
Die Patientenproben (1 ml Plasma) werden mit dem Internen Quantifizierungsstandard versetzt und parallel mit der Negativ-, Low- und High Positiv-Kontrolle bearbeitet. Nach der Beladung des COBAS® AmpliPrep mit Proben, Kontrollen und barcodierten Reagenzkassetten laufen alle weiteren Arbeitsschritte automatisiert bis zur Ergebnisausgabe ab.

Testperformance

Dual-Target-Detektion: gag und 5’ non-coding-region
Analytische Sensitivität: 20 Kopien /ml
Linearer Bereich: 20 bis 107 Kopien / ml
Subtypen-Erfassung:  HIV-1 Gruppe M, Subtypen A-H
HIV-1 Gruppe O
Klinische Spezifität: 100%

Die von Roche entwickelte AmpErase®schützt vor Kontaminationen mit Amplifikaten aus vorhergehenden PCRs. Bevor die eigentliche PCR startet, werden derartige DNS-Amplifikate spezifisch abgebaut, da sie Desoxy-Uracil enthalten.