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Testdurchführung

Der LightCycler® SeptiFast Test ist für das LightCycler® 2.0 Analysesystem ausgelegt.

Um einen sensitiven PCR-basierten Nachweis der Sepsis-Erreger sicherzustellen, muss die Erbsubstanz (Desoxyribonukleinsäure, DNS) der Pathogene freigesetzt werden. Dazu werden dem betroffenen Patienten zunächst 1,5 Milliliter Vollblut entnommen und mit dem MagNA Lyser® Instrument von Roche mechanisch aufgeschlossen (Lyse), indem die Blutzellen mit Keramik- und Glasperlen in starke Schwingungen versetzt werden. Dadurch brechen Zellmembran und Zellkern auf und geben dabei die Erbsubstanz frei, die dann für den sensitiven, PCR-basierten Erreger-Nachweis zur Verfügung steht. Anschließend wird die DNS mit Hilfe eines manuellen Säulenverfahrens extrahiert.

 

Abb.: Testablauf

Die Erbsubstanz der Sepsis-Erreger muss zunächst aus den Zellen extrahiert werden, um sie dann mithilfe der Polymerase-Kettenreaktion amplifizieren zu können.

Zur Amplifikation und Detektion der Erreger-DNS werden im LightCycler® 2.0 Analysesystem pro Probe drei parallele Polymerase-Kettenreaktionen durchgeführt: Jeweils eine für Gram-positive Bakterien, Gram-negative-Bakterien und für den Nachweis von Pilzen.

Abb.: Testdurchführung

Der LightCycler® SeptiFast Test erlaubt in weniger als sechs Stunden aus nur 1,5 Millilitern Vollblut die eindeutige Detektion und Identifizierung von 25 verschiedenen Pathogenen in 20 therapierelevanten Gruppen.

Die eindeutige Identifizierung der Erreger erfolgt durch Analyse der DNS-Schmelzpunkte. Bei der Auswertung wird der Anwender durch die SeptiFast Idenfikations Software (SIS) unterstützt, die neben der eindeutigen Identifizierung der Erreger auch eine Überprüfung des umfangreichen Kontrollkonzepts des LightCycler® SeptiFast Tests ermöglicht. Dieses Kontrollkonzept stellt sicher, dass keine falsch-negativen oder falsch-positiven Befunde generiert werden.

Bei positivem Befund für Staphylococcus aureus, einem Gram-positiven Bakterium, lässt sich durch den LightCycler® SeptiFast mecA Test auch bestimmen, ob der Erreger gegen bestimmte Antibiotika resistent ist. Diese Information ist für den behandelnden Arzt von großer Wichtigkeit um sicherzustellen, dass das von ihm therapeutisch eingesetzte Antibiotikum auch wirksam ist.

Abb.: LightCycler® SeptiFast Testkit

Technisch zeichnet sich der LightCycler® SeptiFast Test durch die MGRADE-Qualität seiner Reagenzien aus.

Technisch zeichnet sich der LightCycler® SeptiFast Test durch die MGRADE-Qualität der verwendeten Reagenzien aus. Dieser Qualitätsstandard bedeutet, dass die Reagenzien frei von nachweisbaren Verunreinigungen mit mikrobieller Erbsubstanz sind, die die Aussagekraft der Ergebnisse beeinträchtigen würde.

LightCycler® 2.0 Instrument

Abb.: LightCycler® 2.0 Instrument

Das LightCycler® 2.0 Instrument

Das LightCycler® Instrument, 1998 von Roche eingeführt, hat sich in vielen Einrichtungen als schnelles und flexibles Real-Time PCR Gerät bewährt. Für die Routine Diagnostik ist das LightCycler® 2.0 System als CE markiertes Gerät mit einer auf die Diagnostik abgestimmten Software-Option verfügbar. Durch die luftregulierte Reaktionskammer und den Einsatz von Glaskapillaren können sehr schnelle PCR-Durchsatzraten erzielt werden. Die Daten werden online bereits während der Amplifikation auf dem Monitor dargestellt, so dass der PCR Verlauf frühzeitig kontrolliert werden kann.

MagNA Lyser® Instrument

Abb.: MagNa Lyser® Instrument

Das MagNa Lyser® Instrument

Das MagNA Lyser® Instrument ist die Gerätekomponente zur gleichzeitigen Homogenisierung von 16 Proben als Vorbereitung zur Isolierung von Nukleinsäuren aus zähen Probenmaterialien.